نوع مقاله : بیماری‌شناسی گیاهی

نویسندگان

• سیدرضا فانی ¹
• محمد مرادی ²
• حمید رضا زمانی زاده ¹
• منصوره میرابوالفتحی ³
• کلودیا پروبست ⁴

¹ گروه بیماری‌شناسی گیاهی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات، تهران

² مؤسسه تحقیقات پسته کشور، رفسنجان

³ بخش تحقیقات بیماری‌های گیاهی، مؤسسه تحقیقات گیاه‌پزشکی کشور، تهران

⁴ دپارتمان بیماری‌شناسی گیاهی، دانشگاه ایالتی واشنگتن، آمریکا

چکیده

آلودگی پسته به زهرابه قارچی آفلاتوکسین از مهم‌ترین محدودیت‌ها در مصرف و تجارت پسته در ایران و جهان است. جدایه‌های غیرتوکسین‌زای قارچAspergillus flavus  برای کاهش آفلاتوکسین پنبه دانه، بادام زمینی و ذرت در جهان استفاده می‌شوند و برنامه مطالعاتی وسیعی برای جایگزینی سویه‌های غیرتوکسین‌زای A. flavus در باغات پسته دنیا در حال انجام است. به منظور پایش و بررسی چگونگی پراکنش جدایه‌های غیرتوکسین‌زای A. flavus در باغات پسته، از خاک باغات و میوه پسته استان‌های کرمان، خراسان رضوی، قم، اصفهان، یزد، سمنان و مرکزی نمونه برداری شد. با استفاده از روش سری‌های رقت و محیط کشت AFPA، جدایه‌های مختلف متعلق به section Flavi  Aspergillusجداسازی و خالص‌سازی شدند. جدایه‌ها بر اساس ویژ‌گی‌های مرفولوژیکی و آغازگرهای اختصاصی در حد گونه شناسایی گردیدند. برای بررسی توانایی تولید آفلاتوکسین ابتدا جدایه‌ها بر اساس تولید نور فلورسنت اطراف پرگنه در محیط‌های نارگیل آگار و YES اصلاح شده با متیل‌بتاسیکلودکسترین و تغییر رنگ میسلیوم در تماس با بخار آمونیاک روی محیط‌های کشت PDA، YES و نارگیل آگار غربال شدند و سپس توانایی تولید آفلاتوکسین با روش کروماتوگرافی لایه نازک اندازه‌گیری شد. از بین 681 جدایه section Flavi  Aspergillus به دست آمده، 524 جدایه بر اساس ویژگی‌های مورفولوژیک گونه ‏A. flavus تشخیص داده شدند، از بین جدایه های مذکور53 جدایه میوه و 10 جدایه خاک قادر به تولید آفلاتوکسین نبودند،. درصد جدایه‌های غیر توکسین‌زای جمع‌آوری شده از مناطق مختلف کشور از 2/6 تا 25 درصد متغیر بود. نتایج همچنین حاکی از آن بود که به جز محیط کشت نارگیل آگار در ترکیب با بخار آمونیاک سایر روش‌‌‌های کشت، درصد جدایه‌های غیرتوکسین‌زا را بیشتر از تعداد واقعی آنها نشان می‌داد، از اینرو در آزمایشگاه‌های با امکانات محدود، استفاده از بخار آمونیاک می‌تواند به عنوان روشی کاربردی، ارزان و سریع با دقت قابل قبول جهت غربال جدایه های توکسین زا مورد استفاده قرارگیرد.

کلیدواژه‌ها

• آفلاتوکسین
• بیوکنترل
• کروماتوگرافی لایه نازک
• ‏A. flavus

عنوان مقاله [English]

Distribution of Nontoxigenic strains of Aspergillus flavus throughout pistachio growing areas in Iran

نویسندگان [English]

• Seyyed Reza Fani ¹
• Mohammad Moradi ²
• Hamidreza Zamanizadeh ¹
• Mansoureh Mirabolfathy ³
• C. PROBST ⁴

چکیده [English]

Aflatoxins are highly toxic secondary metabolites produced by various Aspergillus species in food and feed. Nontoxigenic strains of A. flavus have been used for reducing aflatoxin of several crops. To determine the frequency of atoxigenic A. flavus population, samples were collected from different pistachio producing areas. A serial dilution method and AFPA medium was used to isolate Aspergillus section Flavi isolates. The ability of the isolates to produce aflatoxins was assayed using fluorescence detection (FD) around fungal colonies under UV 366 nm and color changing of colony after ammonia vapor (AV) exposure in the primary screening. First screening stage was validated by thin layer chromatography (TLC) after rice flour inoculation. The species of A. flavus were identified morphologically and molecularly based on species-specific primers. Overall, 524 isolates out of 681 isolates were identified as A. flavus. 53A. flavus isolates from nut and 10 isolates  from soil did not produce any aflatoxins based on the methods used. Comparison of cultural and analytical methods showed FD methods overestimated the frequency of nontoxigenic strains while AV in combination with coconut agar medium produced similar results compare to TLC assays. The AV method can be used in the most laboratories as a practical, cheap, and rapid tool. Further efforts for assessment of competition potential of nontoxigenic strains versus toxigenic strains will be useful.

کلیدواژه‌ها [English]

• aflatoxin
• biocontrol
• Food safety
• Thin layer chromatography