با همکاری انجمن‏‌ بیماری شناسی گیاهی ایران

نویسندگان

1 دانشگاه صنعتی اصفهان

2 تهران، بزرگراه شهید چمران، خیابان یمن (تابناک)، جنوب به شمال نرسیده به انتهای خیابان، سمت راست، موسسه تحقیقات گیاهپزشکی کشور، بخش

چکیده

به منظور تعیین پراکنش و مطالعه برخی خصوصیات بیولوژیکی و مولکولی جدایه‌های ایرانی ویروس موزائیک کلم‌گل (Cauliflower mosaic virus-CaMV)، از 32 مزرعه کلم‌گل
(Brassica oleracea var. botrytis) واقع در 6 استان کشور بازدید به عمل آمد. نمونه‌برداری در فصول مختلف انجام و مجموعاً 323 نمونه برگی کلم‌گل علائم‌دار جمع‌آوری گردید. این نمونه‌ها با روش سرولوژیکی الایزا و به کمک آنتی‌بادی اختصاصی CaMV مورد سنجش قرار گرفتند. نتایج آزمون‌‌ سرولوژیکی با استفاده از آزمون‌های بیولوژیکی و نیز واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز مورد تأیید قرار گرفت. بر اساس آزمون الایزا، 292 نمونه کلم‌گل (4/90 درصد) به CaMV آلوده بودند. میزان آلودگی در مزارع نمونه‌برداری شده بین 6/63 تا 100 درصد متفاوت بود. خصوصیات بیولوژیکی 21 جدایه از مناطق مختلف و با شدت علائم متفاوت، بر اساس بیماریزایی آن‌ها روی شلغم (Brassica rapa)، داتوره (Datura stramonium) و کلم‌قمری (Brassica oleracea var. gongylodes) مورد مطالعه قرار گرفت. این جدایه‌ها روی شلغم علائم متفاوتی شامل لکه‌های موضعی و پس از آن رگ‌روشنی، موزائیک، رگ‌نواری، چین‌خوردگی و بازماندن از رشد ایجاد نمودند. شدت علائم سیستمیک ایجاد شده بسته به جدایه مورد بررسی متفاوت بود. برخلاف شلغم، علائم ایجاد شده در کلم‌قمری محدود به برگ‌های پایینی و مایه‌زنی شده بود و شدت علائم نیز در مقایسه با شلغم بسیار خفیف‌تر بود. تمامی گیاهان کلم‌قمری مایه‌زنی شده با جدایه‌های مورد نظر حالت بهبودی نشان داده و علائم در برگ‌های بالایی مشاهده نشد. یازده جدایه در گیاه داتوره نیز لکه‌های موضعی ایجاد نموده و دو جدایه علاوه بر ایجاد لکه ‌موضعی، این میزبان را بصورت سیستمیک آلوده نمودند. همه 21 جدایه‌ CaMV با شته سبز هلو (Myzus persicae) منتقل گردیدند. برای تجزیه مولکولی و رسم درخت تبارزایی، ژن شماره شش (ORFVI) مربوط به نه جدایه با استفاده از آغازگرهای اختصاصی، تکثیر و تعیین ترادف گردید. نتایج بدست آمده، نشان‌دهنده یکنواختی بالای این ناحیه (9/96 تا 100 درصد) در بین جدایه‌های ایرانی بود. مقایسه این ترادف‌ها با ترادف‌های موجود در بانک ژن نشان داد که این جدایه‌ها دارای بیشترین یکنواختی (1/96 تا 7/96 درصد) با جدایه D/H (از مجارستان) می‌باشند. بر اساس تجزیه تبارزایی، جدایه‌های ایرانی مورد مطالعه در گروه جدایه‌های غیر آمریکای شمالی و در یک شاخه جداگانه قرار گرفتند. همچنین با استفاده از آنزیم برشی Hpy99I، جدایه‌های ایرانی مورد مطالعه از سایر جدایه‌های خارجی، کاملاً تفکیک شدند.
 

کلیدواژه‌ها

عنوان مقاله [English]

Distribution and some biological and molecular properties of Cauliflower mosaic virus isolates from Iranian cauliflower fields

نویسندگان [English]

  • Shirin Farzadfar
  • Gholamhosin MOSAHEBI
  • Ali Ahoonmanesh 1
  • Mina KOOHI-HABIBI
  • Reza Pourrahim 2
  • K. OHSHIMA
  • Alireza Golnaraghi

2 Researcher

چکیده [English]

A survey was conducted to determine the distribution of Cauliflower mosaic virus (CaMV) in cauliflower (Brassica oleracea var. botrytis) fields. A total of 323 symptomatic cauliflower leaf samples were collected during different growing seasons from 32 fields in six provinces of Iran. These samples were tested by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using specific CaMV-polyclonal antibody. Serological diagnosis was confirmed by biological and polymerase chain reaction (PCR) tests. Based on ELISA, 292 cauliflower samples (90.4%) were infected with CaMV, ranging between 63.6-100% in the surveyed fields. Biological diversity of 21 CaMV isolates from various regions and with different symptom severity was evaluated based on their reactions on turnip (Brassica rapa), jimpson weed (Datura stramonium) and kohlrabi (B. oleracea var. gongylodes) plants. These isolates caused a variety of symptoms on turnip, including local lesions followed by vein clearing, mosaic, vein banding, rugosity and stunting. The severity of systemic symptoms observed varied depending on the isolate. In contrast, symptoms produced by the same isolates in Kohlrabi plants were restricted to older leaves and were much milder. Kohlrabi plants infected by all isolates tested eventually showed recovery and became asymptomatic. Eleven isolates induced local lesions on jimpson weed, and for two isolates, these symptoms were followed by systemic infections. All 21 isolates studied, were transmitted by green peach aphid (Myzus persicae). For molecular studies, ORF VI gene of nine selected CaMV isolates were amplified using specific primers. Comparison of sequences of the amplified fragments revealed a high identity (96.9-100%) among Iranian isolates studied. Comparison of these sequences with those available at GenBank indicated the highest identities of these isolates with D/H isolate from Hungary (96.1-96.7%). Phylogenetic studies showed clustering of Iranian isolates in a separate branch, together with the non-North American isolates. The Iranian isolates were also well differentiated from other exotic isolates using Hpy99I restriction enzyme.
 

کلیدواژه‌ها [English]

  • Cauliflower mosaic virus
  • Caulimovirus
  • ORF VI
  • nucleotide sequencing
  • DNA viruses
  • Crucifer viruses
Agama, K., J. Beach, J. Schoelz and S. M. Leisner, 2002. The 5’ third of Cauliflower mosaic virus gene VI conditions resistance breakage in Arabidopsis Ecotype Tsu-0. Phytopathol. 92: 190-196.
Al-Kaff, N. S. and S. N. Covey, 1994. Variation in biological properties of cauliflower mosaic virus clones. J. Gen. Virol. 75: 3137-3145.
Al-Kaff, N. S. and S. N. Covey, 1995. Biological diversity of cauliflower mosaic virus isolates expressed in two Brassica species. Plant Pathol. 44: 516-526.
Al-Kaff, N. S., D. S. Turner and S. N. Covey, 1997. Multiple pathogenic factors influence aphid transmission of cauliflower mosaic virus from infected plants. European Journal of Plant Pathol. 103: 65-71.
Altschul, S. F., T. L. Madden, A. A. Schaffer, J. Zhang, Z. Zhang, W. Miller and D. J. Lipman, 1997. Gapped BLAST and PSI-BLAST: A new generation of protein database search programs. Nucl. Acids Res. 25: 3389-3402.
Anderson, E. J., S. G. Qiu and J. E. Schoelz, 1991. Genetic analysis of determinants of disease severity and virus concentration in cauliflower mosaic virus. Virology 181: 647-655.
ANONYMOUS, 2000. FAOSTAT Database results from FAO web site; http://apps.fao.org/ servlet/XteServlet.
ANONYMOUS, 2003. FAOSTAT Database results from FAO web site; http://apps. fao.org/ servlet/XteServlet.
Anonymous, 2003. Statistical Glance at 2003 Agriculture in Iran. Ministry of Agriculture, Deputy of Planning and Economy, Statistics and Information Technology Office, 2003.
Blanc, S., E. Hebrard, M. Drucker and R. Froissart, 2001. Molecular basis of vector transmission: Cauliflower mosaic virus Cabb-S strain and S delta II hybrid transmission by two species of aphid: Myzus persicae (Sulzer) and Brevicoryne brassicae (L.). Research in Virology 141: 677-683.
Burland, T. G. 2000. Dnastar’s lasergene sequence analysis software. Methods Mol. Biol., 132:71–91
Chenault, K. D. and U. Melcher, 1994a. Patterns of nucleotide sequence variation among cauliflower mosaic virus isolates. Biochimie 76: 3-8.
Chenault, K. D. and U. Melcher, 1994b. Phylogenetic relationships reveal recombination among isolates of cauliflower mosaic virus. J. Mol. Evol. 39: 496-505.
Clark, M. F. and A. N. Adams, 1977. Characteristics of the microplate method of enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of plant viruses. J. Gen. Virol. 34: 475-483.
COVEY, s. N. 1991. Pathogenesis of a plant pararetrovirus: CaMV. Sem. Virol. 2: 151-159.
Daubert, S. and G. Routh, 1990. Point mutations in cauliflower mosaic virus gene VI confer host specific symptom changes. Mol. Plant Mic. Interac. 3: 341-345.
Daubert, S. D., J. Schoelz, L. Debao and R. J. Shepherd, 1984. Expression of disease symptoms in cauliflower mosaic virus genomic hybrids. J. Mol. Appl. Gen. 2: 537-547.
Farzadfar, Sh., R. Pourrahim, A. R. Golnaraghi and A. Ahoonmanesh, 2005. Occurrence of Cauliflower mosaic virus in different cruciferous plants in Iran. Plant Pathol. 54: 810.
Fereres, A., P. Perez, C. Gemeno and F. Ponz, 1993. Transmission of spanish pepper and potato PPY by aphid (Hmo.: Aphididae) vectors: Epidemiological implications. Environmental Entomology 22: 1260-1265.
Garcia, O. and R. J. Shepherd, 1985. Cauliflower mosaic virus in the nucleus of Nicotiana. Virology 146: 141-145.
Gray, S. M. and N. Banerjee, 1999. Mechanisms of arthropod transmission of plant and animal viruses. Microbiol. Mol. Biol. Revi. 63: 128-148.
Haas, M., B. Marin, A. Gelderich, P. Yot and M. Keller, 2002. Cauliflower mosaic virus: still in the news. Mol. Plant Pathol. 3: 419-429.
Kennedy, J. S., M. F. Day and V. F. Eastop, 1962. A conspectus of aphids as vectors of plant viruses. London: Common wealth Institute of Entomology, 114 pp.
loenbenstein, g., p. h. berger, a. a. Brunt and r. h. lowson, 2001. Virus and virus-like diseases of potatoes and production of seed potatoes. Kluwer Academic Publisher, The Netherlands.
Lung, M. C. Y. and T. P. Pirone, 1972. Datura stramonium, a local lesion host for certain isolates of cauliflower mosaic virus. Phytopathology 62: 1473-1474.
Lung, M. C. Y. and T. P. Pirone, 1973. Studies on the reason for differential transmissibility of cauliflower mosaic virus isolates by aphids. Phytopathology 63: 910-914.
Mason, W. S., J. M. Taylor and R. Hull, 1987. Retroid virus genome replication. Adv. Virus Res. 32: 35-96.
Palacios, I., M. Drucker, S. Blanc, S. Leite and A. Moreno, 2002. Cauliflower mosaic virus is preferentially acquired from the phloem by its aphid vectors. J. Gen. Virol. 83: 3163-3171.
Pique, M., J. L. Mougeot, A. Geldreich, T. Guidasci, J. M. Mesnard, G. Lebeurier and R. Yot, 1995. Sequence of a cauliflower mosaic virus strain infecting solanaceous plants. Gene 155: 305-306.
Pirone, T. and S. Blanc, 1996. Helper dependent vector transmission of plant viruses. Annual Review of Phytopathology 34: 227-247.
Qiu, S. G. and J. E. Schoelz, 1992. Three regions of cauliflower mosaic virus strain W260 are involved in systemic infection of solanaceous hosts. Virology 190: 773-782.
Qiu, S. G., W. M. Wintermantel, Y. Sha and J. E. Schoelz, 1997. Light dependent systemic infection of solanaceous species by cauliflower mosaic virus can be conditioned by viral gene encoding an aphid transmission factor. Virology 236: 137-146.
Sambrook, S., E. F. Fritch and T. Maniatis, 1989. Molecular cloning: a laboratory manual, 2nd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, USA.
Sanger, M., S. Daubert and R. M. Goodman, 1991. The regions of sequence variation in caulimovirus gene VI. Virology 182: 830-834.
Schoelz, J. E. and R. J. Shepherd, 1988. Host range control of cauliflower mosaic virus. Virology 162: 30-37.
Schoelz, J. E., R. J. Shepherd and R. D. Richins, 1986. Properties of an unusual strain of cauliflower mosaic virus. Phytopathology 76: 451-454.
Shahraeen, N., Sh. Farzadfar and D. E. Lesemann, 2003. Incidence of viruses infecting winter oilseed rape (Brassica napus ssp. oleifera) in Iran. Journal of Phytopathology 151: 614-616.
Shepherd, R. J. 1981. Cauliflower mosaic virus. AAB descriptions of plant viruses, No. 243.
Sutic, D.D., R. E. Ford and M. T. Tosic, 1999. Handbook of plant virus diseases. CRC Press, Boca Raton, Florida, USA.
Thompson, J. D., D. G. Higgins and T. J. Gibson, 1994. CLUSTAL W: improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties, and weight matrix choice. Nuc. Acids Res. 22: 4073-4080
Wintermantel, W. M., E. J. Anderson and J. E. Schoelz, 1993. Identification of domains within gene VI of cauliflower mosaic virus that influence systemic infection of Nicotiana bigelovii in a light-dependent manner. Virology 196: 789-798.
Woodford, j. a. t., 1988. The impact of cropping pattern policy on methods to control potato leafroll virus. Aspects Applied Biol. 17: 163-171.